抗凝收集血漿的方法

 

    1、肝素抗凝： 

 

    常用的抗凝劑，一般情況下對(duì)相關(guān)指標(biāo)都不會(huì)有干擾，同時(shí)抗凝比例較大（抗凝劑： 全血=1:30），對(duì)血液基本沒(méi)有稀釋影響。 

 

    肝素是一種含有硫酸基團(tuán)的粘多糖，帶有強(qiáng)大的負(fù)電荷，具有加強(qiáng)抗凝血酶III滅活絲 氨酸蛋白酶的作用，從而阻止凝血酶的形成，并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。肝素管一般用于生化及血流變的檢測(cè)，是電解質(zhì)檢測(cè)的*選擇，檢驗(yàn)血標(biāo)本中的鈉離子時(shí)，不能使用肝素鈉，以免影響檢測(cè)結(jié)果。也不能用于白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類(lèi)，因肝素會(huì)引起白細(xì)胞聚集。 盡管用肝素的三種鹽抗凝所得電解質(zhì)濃度無(wú)顯著差別，但肝素鋰還是被認(rèn)為是的。這主要是人們認(rèn)為肝素鈉可使鈉的測(cè)定值偏高，肝素銨可使血氨測(cè)定值偏高（尿素酶法測(cè)定）。 

 

    肝素可抑制分子生物學(xué)中常用的一些工具酶，如限制性?xún)?nèi)切酶、Taq酶等，可影響PCR 的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。可采用一些方法消除肝素的抑制效應(yīng)，如利用肝素酶，或在分離白細(xì)胞后用緩沖液洗滌白細(xì)胞兩次以上等。然而，許多實(shí)驗(yàn)工作者仍不愿意在進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)采用肝素作抗凝劑。 

 

    2、EDTA抗凝： 

 

    乙二胺四乙酸是一種氨基多羧基酸，可以有效地鰲合血液中的鈣離子，鰲合鈣會(huì)將鈣從 反應(yīng)點(diǎn)移走將阻止和終止內(nèi)源性或外源性凝血過(guò)程，從而防止血液凝固，與其他抗凝劑比較而言，其對(duì)血球的凝集及血細(xì)胞的形態(tài)影響較小，故通常使用EDTA鹽(2K、3K、2Na)作為抗凝劑。用于一般血液學(xué)檢查，不能用于血凝、微量元素及PCR檢查。由于EDTA會(huì)螯合重金屬離子，用該抗凝劑的話，部分帶有金屬離子的大分子酶都會(huì)有大量損失，具體看客戶(hù)測(cè)定的指標(biāo)來(lái)選擇，做血常規(guī)的話必須用EDTA抗凝。 

 

    3、枸櫞酸鹽抗凝： 

 

    檸檬酸鈉通過(guò)作用于血樣中鈣離子鰲合而起抗凝作用，國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)推薦為3.2％或3.8％，抗凝劑與血比例為1：9，主要用于纖溶系統(tǒng)(凝血酶原時(shí)間、凝血酶時(shí)間、活化部分凝血酶時(shí)間、纖維蛋白原)。采血時(shí)應(yīng)注意采足血量，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，采血后應(yīng)立即輕輕顛倒混勻5-8次。由于抗凝比例較小（抗凝劑：全血=1:9），對(duì)血液有一定的稀釋?zhuān)话悴唤ㄗh。 

 

    選擇抗凝的注意點(diǎn)： 

 

    ①.每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致; 

 

    ②.收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固; 

 

    ③.抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4-0.5ml血漿）; 

 

    ④.抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后 用于測(cè)定。 

 

    血清、血漿收集好后，暫時(shí)不測(cè)定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間如*凍融，-20℃以下可保存一個(gè)月,-70℃以下可保存三個(gè)月。