PCR試劑盒的使用注意事項(xiàng)有哪些

　　PCR即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點(diǎn)，通過(guò)變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過(guò)程。

　　PCR試劑盒是一項(xiàng)DNA體外合成放大技術(shù)，能快速特異地在體外擴(kuò)增一定長(zhǎng)度的DNA段。可用于基因分離克隆，序列分析，基因表達(dá)調(diào)控，基因多態(tài)性研究等許多方面，且價(jià)格合適。

　　PCR試劑盒的使用注意事項(xiàng)有哪些：

　　注意事項(xiàng)一：保存

　　未拆封的試劑盒，請(qǐng)于-20℃保存；拆封之后，應(yīng)在4℃保存。

　　在試劑消耗量較少的實(shí)驗(yàn)室，可以考慮將按照組分單獨(dú)分裝，后保存在-20℃。

　　注意事項(xiàng)二：配置

　　試劑盒內(nèi)所含各組份都是混合物，在靜置情況下會(huì)發(fā)生分層現(xiàn)象，因此，現(xiàn)配現(xiàn)用，震蕩混勻，避免反復(fù)凍融，避免預(yù)混。其中，反復(fù)凍融將大幅縮短使用壽命。

　　在擴(kuò)增體系的選擇時(shí)，盡量選擇標(biāo)準(zhǔn)體系，再根據(jù)檢材情況加入模板，之后切勿忘記以PCR用水補(bǔ)足擴(kuò)增體系。

　　注意事項(xiàng)三：切勿預(yù)混

　　因試劑盒中酶的活性較高，將各組份按照比例混合之后，即使沒(méi)有達(dá)到它的較適溫度，但也可能發(fā)生與引物結(jié)合，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)丟位點(diǎn)或者雜合子純化等情況。

　　注意事項(xiàng)四：陰陽(yáng)性參照

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)受提取、擴(kuò)增和電泳等多個(gè)環(huán)節(jié)的影響，因此，每次擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)都應(yīng)該添加一組陰陽(yáng)性參照。這樣，當(dāng)結(jié)果異常的時(shí)，我們就可以結(jié)合陰陽(yáng)性參照的表現(xiàn)，排查問(wèn)題出在哪個(gè)環(huán)節(jié)。

　　注意事項(xiàng)五：陽(yáng)性參照是否通用

　　雖然多數(shù)試劑盒的陽(yáng)性參照都是007，但是案件試劑盒和建庫(kù)試劑盒的陽(yáng)性參照濃度不同，通常來(lái)說(shuō)案件試劑盒的濃度更低。

　　注意事項(xiàng)六：擴(kuò)增程序

　　擴(kuò)增程序是能夠?qū)⒃噭┖懈笮馨l(fā)揮出來(lái)而設(shè)計(jì)，切勿隨意更改；再者，不同試劑盒所含酶的升溫模式也有不同，因此，在設(shè)置擴(kuò)增程序時(shí)，要選擇對(duì)應(yīng)的升溫模式。